摘要：目的 研究在手足口病标本检测中不同分子生物学方法的应用效果。 方法 选取我院在2016年12月-2018年1月收治的120份手足口病标本，将其随机分为对照组与观察组各为 例，全部的实验对象都使用常规治疗，对患儿分别采用巢式PCR、一步法RT-PCR 及实时RT-PCR三种检测方法进行检测，比较患儿的阳性检测率 。结果 在巢式PCR、一步法RT-PCR 及实时RT-PCR三种患儿中分别得到了不同的阳性诊断结果，运用实时RT-PCR 法与巢式PCR 法能够得出更高的检测率。 结论 巢式PCR与RT-PCR的运用能够有效检测出小儿手足口病的发生，准确度比较高，具有重要的应用价值。
【关键词】：不同分子生物学；手足口病；标本检测；阳性率
手足口病是临床上一种比较常见的小儿性传染性疾病，对患儿的身体健康产生了不同程度的影响^[1]，一般主要发生在5岁以下的儿童之中，患儿发病的机理是由于科萨奇病毒A组16型以及肠道病毒71型病原体的发生^[2]。目前在临床治疗中的药物使用比较有限，因此需要加强对手足口病的有效诊断，从而能够进行及早治疗^[3]。采用不同分子生物学方法能够有效检测出患儿手足口病的发生情况。
1.临床资料与研究方法
1.1临床资料概述　
本次研究过程中的实验对象是我院在2016年12月-2018年1月收治的120份住院患儿。120例患儿均呈现出了临床上手足口病的诊断标准，出现了发热、口腔溃疡、皮疹等临床症状表现，患者在中枢神经系统上也出现了不同程度的异常现象。具有66例男性患儿，54例女性患儿，年龄分布在9个月-5岁之间，患儿的平均年龄是（3.2±1.6）岁。120例患儿分别运用了不同的生物分子检测方法。
1.2研究方法　
对120例标本进行无菌操作，收集患儿的粪便，将其放置到大便盒中。擦拭患儿的扁桃体与咽后壁位置，进行咽后部位样本的采集。将棉签放置到3mL Hank 采样管之中。将其放置在-80度的冰箱中进行保存，对标本分别运用巢式PCR、一步法RT-PCR 及实时RT-PCR检测方法进行检测，使用Promega 公司生产的PCR 扩增仪与试剂盒，在45度的温度下进行45分钟逆转录的处理，之后将温度调整到94度进行预变性处理， 通过20秒的处理之后进行退火处理，要求处于45度的环境之下，维时30s，一共进行36个循环。
1.4 统计学方式
本文研究中运用SPSS 18.0软件搜集统计数据并进行分析，计量资料用（x±s）表示，采用t检验，计数资料用率（%）表示，采用χ²检验，P<0.05差异有统计学意义。
2. 结果
在巢式PCR、一步法RT-PCR 及实时RT-PCR三种患儿中分别得到了不同的阳性诊断结果。将其在重死患儿、轻症患儿、住院患儿三种类型患儿中进行分别诊断。
在实时RT-PCR组患儿中，重死患儿。轻症患儿、住院患儿三种类型的患儿中得到的阳性检测结果分别是80%、22.9%与80%；在一步法RT-PCR组中，重死患儿、轻症患儿、住院患儿三种类型的患儿中得到的阳性检测结果分别是45%、8.6%与16.7%；同时在巢式PCR组中，重死患儿、轻症患儿、住院患儿三种类型患儿中得到的阳性检测结果分别是85%、25.7%与86.7%。实时RT-PCR检测方法与巢式PCR 取得了比一步法RT-PCR更加精准的检测效果，具体的诊断数据见下表1。
表1 三组患儿的手足口病阳性结果[n(%)]

组别	重死患儿标本（n =20）		轻症患儿标本（n =70）		住院患儿标本（n =30）
	EV71　　CA16		EV71　　CA16		EV71　　CA16
实时 一步法 巢式	16（80%） 9（45%） 17（85%）	1（5%） 1（5%） 1（0）	16（22.9%） 6（8.6%） 18（25.7%）	22（31.4%） 10（14.3%） 23（32.9）	24（80%） 5（16.7%） 26(86.7%)	1(3.3%) 0(0) 3(10%)

3.讨论
手足口病在低龄段儿童中发生几率比较大，属于出诊性疾病的一种，其发病原因包括人肠道病毒属、微小核糖核酸病毒等病原体的产生^[4]。患儿由于自身发育等原因的影响，抵抗力比较低，手足口病的发生对患儿的健康成长造成了非常不良的影响作用，因此需要加大对手足口病的诊断与治疗^[5]。采用不同分子生物学方法具有重要的检测价值，目前主要包括巢式PCR、一步法RT-PCR 及实时RT-PCR等，在运用过程中分别具有不同的检测敏感性与特异性等。
本文的研究过程中，在巢式PCR、一步法RT-PCR 及实时RT-PCR三种患儿中分别得到了不同的阳性诊断结果，运用实时RT-PCR 法与巢式PCR 法能够得出更高的检测率，具有重要的应用价值，可以将其运用到小儿手足口病的治疗过程中。
【参考文献】：
[1]关桂英, 王风朝. 不同分子生物学方法检测手足口病标本的应用分析[J]. 当代医学, 2014(22):133-134.
[2]粘志光. 不同分子生物学方法检测手足口病标本的应用研究[J]. 中国卫生产业, 2016, 13(16):105-107.
[3]陈创. 不同分子生物学方法检测手足口病标本的比较[J]. 锦州医科大学学报, 2016, 37(4):21-22.
[4]关桂英, 王风朝. 不同分子生物学方法检测手足口病标本的应用分析[J]. 当代医学, 2014(22):133-134.
[5]周卫岭, 胡雪梅. 2011~2013年某市手足口病标本病毒检测结果分析[J]. 医学信息, 2014(12).