李莉莉 陈双
温州市人民医院 输血科　 温州 浙江 325000
摘要：目的 鉴定1例Bm亚型并复习相关知识。方法 综合应用血清学实验方法，包括血型鉴定、不规则抗体筛查、吸收放散实验、唾液血型物质测定，对1例ABO血型系统Bm亚型进行鉴定。结果 该患者ABO血型鉴定结果为正定型为O型，反定型为B型；不规则抗体筛查试验结果阴性；红细胞吸收放散试验中，红细胞含有极弱的B抗原；唾液血型物质检测中，含有B物质和H物质。结论 该患者ABO血型为Bm亚型，综合应用血清学实验方法可有效提高ABO血型检测结果的准确性。
【关键词】 Bm；亚型；ABO血型；血型鉴定

在ABO血型系统中，除了常规的四大血型外，还存在着一些表达弱A或弱B抗原的亚型，它们大多是由于ABO位点稀有等位基因的遗传造成的[1]。ABO血型亚型的复杂性常常造成血型的误判，为临床输血造成安全隐患。近期我们实验室接收了一例ABO正、反定型不符的标本，经血型血清学检测，此例标本表现为Bm亚型，报道如下。
一、资料与方法
1.1 一般资料 患者，女，50岁，前庭大腺囊肿，子宫肌瘤入院手术常规备血，无外伤史，无输血史，无移植史，无长期用药史。
1.2 试剂和材料 抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H、A细胞、B细胞、O细胞（上海市血液生物医药有限责任公司），不规则抗体筛选红细胞试剂（江苏力博医药生物技术股份有限公司），ABO血型卡、低离子抗人球蛋白卡（BIO-RAD公司，微住凝胶法），试剂均在有效期内使用； TD-3A血型血清学离心机、免疫微柱孵育器（江苏力博医药生物技术股份有限公司），BASO离心机。
1.3 血型血清学检查
1.3.1手工试管法 取洁净试管4支，分别加入抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H血清各2滴，再分别加入患者洗涤3次后配置的3%红细胞悬液一滴，混合；另取洁净试管3支，各加入患者血清2滴，再分别加入Ac、Bc、Oc悬液1滴，混合；另取1支试管，加入患者血清2滴及患者3%红细胞悬液1滴，混合。分别在4℃、室温、37℃，1300g离心15s，记录结果。
1.3.2 微住凝胶法 将患者1%红细胞悬液加入ABO血型卡，每孔50ul，直接离心；另将患者血清加入低离子抗人球蛋白卡，每孔25ul，并各加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ筛选细胞50ul，置于免疫微柱孵育器中37℃孵育15min，离心，记录结果。
1.3.3 吸收放散实验 将患者细胞用盐水洗涤4次，留取末次洗液，在压积细胞中加入抗-B血清，在4℃孵育60min，期间不时的混匀，1000g离心5min，取吸收液检查。取吸收后的细胞，用盐水洗涤4次，加入等量的盐水，56℃水浴放散10min后，离心，留取放散液。分别取2滴原液、洗液、吸收液、放散液各放入4支试管中，分别加入1滴Bc悬液，1300g离心15s，记录结果。
1.3.4 HAB血型物质测定 留取患者唾液2ml，离心，取上清液放入沸水浴中煮沸10min，再次离心，留取上清液备用。分别取最适稀释度的抗-B、抗-H血清0.1ml各加入一洁净试管中，再加入患者唾液0.1ml，混匀，中和5min。用B型红细胞和O型红细胞分别检测中和后的抗-B、抗-H血清，离心观察结果。
二、结果
2.1 ABO血型鉴定结果 该患者试管法血型正定型为O型，反定型为B型，见表1；微柱凝胶法结果见表2


2.2 吸收放散试验结果 根据吸收放散结果发现，该患者血样含有极弱的B型抗原。见表3



该患者的红细胞与抗-B和抗-AB不凝集，经过吸收放散试验可检出B抗原，考虑其ABO血型可能为Bm或Bel亚型，但经HAB血型物质检测，结果为唾液中含有B物质，而Bel分泌型人唾液中不含B物质，只含H物质，由此可以排除Bel血型[1]，该患者ABO血型为Bm亚型。
三、讨论
ABO血型系统的亚型具有一定的血清学特点，并有不同的分子机制。在变异的表现型中，多数是由于ABO位点等位基因的遗传造成[2]。ABO亚型在人群中频率约为1/万-10/万，其中B亚型比A亚型要少得多，主要在中国人群中发现[3]。
截止到2009年，国际输血协会(International Society of Blood Transfusion，ISBT)已经确认了308个血型特异性抗原，其中270个分属于已明确的30个血型系统[4]。 ABO血型系统是输血医学中最重要的系统[5]。基因位于第9号染色体上(9q34.1-q34.2)，基因名为ABO，DNA链长19．5 kb，编码ABH抗原，ABO基因直接编码特异性糖基转移酶，并由这些酶分别将糖分子转移到抗原表位的糖链上合成ABO抗原[6]。红细胞血型由体内抗原和抗体共同决定：抗原形成方面，A基因编码a-1，3-N-乙酰-D半乳糖胺转移酶(A酶)，辅助形成A抗原；B基因编码a-1，3-D半乳糖转移酶(B酶)，辅助形成B抗原；人类红细胞膜具有A抗原或B抗原，称之为A型血或B型血；若两种抗原都有，称之为AB型血；若两种抗原都没有，只有H抗原，则称之为O型血；抗体形成方面，抗A、抗B存在于所有缺少相应抗原的人血清中(新生儿除外，新生儿ABO抗体很少)，没有相应的ABO抗体的成人极罕见[7]。
在临床输血过程中，一般是ABO同型输注，故ABO血型的正确判定是保证临床安全输血的基础。ABO亚型是由于红细胞携带的A或B抗原数量少，与抗A或抗B反应较弱，甚至不发生凝集，因而往往使弱A或弱B错判为O型，造成血型鉴定错误。为保证输血安全，此类患者最好选择相同的亚型输注或O型洗涤红细胞；同时应按规定在配血试验中选择除生理盐水介质外的另一种能检出IgG抗体的介质。
参考文献

[1]孟童，刘敬闪，田亚娟，等.Bm亚型1例[J].河北医药，2012,34（23）：3680.
[2]Zhang R，Su PC，Tian L，et al.Molecular genetic analysis of ABO subgroup in Kunming，Chin J Blood Transfus，2012,25:219-223.
[3]朱发明，许先国，洪小珍，等．a1，3半乳糖基转移酶基因721c>T突变导致Bw亚型．中华医学遗传学杂志，2005，22：138-141．
[4]陈小伍．于新发，田兆嵩．输血治疗学[M]．北京：科学出版社．2012：1-2．
[5]Daniels G.Human blood groups[M].2nd ed.Oxfod;Blackwell Scientific，2002:19-24.
[6]邱丽，蔡晓红，苗温，等．1个新的Bm等位基因鉴定附文献复习[J]．中国输血杂志，2014.27(2):143-146.
[7]王满妮，陈利萍．吴大洲，等．a-1，3-N-乙酰半乳糖胺等位基因421T >C突变导致A抗原弱表达[J].中华医学遗传学杂志，2015.32(1):105-108.